Pfizer doing SARS-COV2 Gain of Function

Uporabnik johan_blond je napisal:

Kakšno kontrolo si pogrešal (leta1954), kaj točno te moti. Povej en stavek v trdilni obliki.

En primer poznavanja virusov in stanje tehnike v tretjem tisočletju.

Kitajsko cepivo Sinovac, ki je bilo narejeno po klasičnem postopku in je klasično inaktivirano cepivo. Izoliran virus so kitajci razmožili v celicah, in to v takih količinah, da ga izolirajo in pripravijo inaktivirano cepivo.

Si zadovoljen s to izolacijo in razmoževanjem virusa, je tudi to zarota, .... ali sicer napisano drži, ampak ....

Povej, kaj te moti.

"As an inactivated vaccine like the Sinopharm BIBP vaccine and Covaxin, CoronaVac uses a more traditional technology that is similar to the inactivated polio vaccine. Initially, a sample of SARS-CoV-2 from China was used to grow large quantities of the virus using vero cells. From then on, the viruses are soaked in beta-propiolactone, which deactivates them by binding to their genes, while leaving other viral particles intact. The resulting inactivated viruses are then mixed with the adjuvant aluminium hydroxide."

CoronaVac - Wikipedia

en.wikipedia.org

Klikni za razširitev

Izoliran virus so kitajci razmožili v celicah, in to v takih količinah, da ga izolirajo in pripravijo inaktivirano cepivo.

Klikni za razširitev

Uporabnik johan_blond je napisal:

Kakšno kontrolo pogrešaš tukaj?

Klikni za razširitev

Uporabnik Feniks je napisal:

Obstaja poskus, kjer so naredili samo postopek s to brozgo, brez dodajanja vzorca ali pa je bil vzorec samo recimo nevtralna fiziološka?

Klikni za razširitev

Uporabnik jest5 je napisal:

To je osnova katerekoli resne raziskave.
Ja, so naredili, vedno vzporedno z vzorcem.

Klikni za razširitev

Uporabnik johan_blond je napisal:

Jaz sem povsem resen:
a) preden gojijo SARS-CoV-2 virus ga analizirajo s PCR, da potrdijo, da je pravi
b) dejanski virus prenesejo (strain CN2) in gojijo v vero celicah, vejetno tudi naredijo par pasaž, da dobijo veliko količine virusa
c) virus izolirajo in očistijo s ionsko-izmenjevalno kromatografijo (IEC) in velikostno izključitveno kromatografijo (SEC)
c) ko je virus nagojen in očiščen, ga preverijo s PCR (testiranje genetske stabilnosti) in to vedno znova (vsaka serija)

Še enkrat, če ti uspe nagojiti virus, je to najlepša potrditev da virus je (npr. če ti ne uste nagojiti virusa, to še ni potrditev, da virusa nikoli ni bilo). Če ti uspe gojiti virus na industrijski skali, je to še toliko boljša potrditev.

To, da prejemniki Sinovac cepiva tvorijo protitelesa proti SARS-CoV-2 spike proteinu je indirektna potrditev obstoja virusa.

Še enkrat, kakšno kontrolo bi ti rad.

Klikni za razširitev

Uporabnik Feniks je napisal:

moraš najprej virus DOKAZANO izolirat in osamit (da dobiš čisti vzorec snovi, ki jo iščeš v naključnem vzorcu). Mene zanima ta dokaz, ta pa vključuje kontrolni vzorec.

Klikni za razširitev

Electron microscopy images and morphometric data of SARS-CoV-2 variants in ultrathin plastic sections - Scientific Data

Conventional thin section electron microscopy of viral pathogens, such as the pandemic SARS-CoV-2, can provide structural information on the virus particle phenotype and its evolution. We recorded about 900 transmission electron microscopy images of different SARS-CoV-2 variants, including Alpha...

doi.org

Uporabnik johan_blond je napisal:

https://doi.org/10.1016/j.isci.2023.106634

Evaluation of SARS-CoV-2 isolation in cell culture from nasal/nasopharyngeal swabs or saliva specimens of patients with COVID-19 - Scientific Reports

It has been revealed that SARS-CoV-2 can be efficiently isolated from clinical specimens such as nasal/nasopharyngeal swabs or saliva in cultured cells. In this study, we examined the efficiency of viral isolation including SARS-CoV-2 mutant strains between nasal/nasopharyngeal swab or saliva...

doi.org

Redirecting

Preštudiraj in povej, katero kontrolo pogrešaš .

Klikni za razširitev

Uporabnik Feniks je napisal:

V redu, torej se greva izčrpavanje. Ker te jemljem (in sem te vedno jemal) kot razumnega in opreativno sposobnega človeka to, da ne rezumeš kaj prav zaprav želim ni opcija. Ali pač?!

"For the establishment of a SARS-CoV-2 freezer stock, 700 µL of a positive SARS-CoV-2 sample (confirmed positive by RT-PCR with a cycle threshold [Ct] <25) was transferred to a 25 cm2 culture flask with VERO E6 cells."


Od kje je prišl dokazano čist vzorec na podlagi katerega so določili PCR? Še enkrat, zanima me papir kjer je opisana metoda izolacije, ki vključuje kontrolni vzorec. Ne da v papirju piše, da so dobili vzorec, ki so ga preverili s PCR (če sem kje zgrešil kontrolo, se bom pustil popraviti. bom pa tole prebral še enkrat ko bom imel malenkost več časa). Mene zanima začetek te vrste.
Sem videl tudi tvoj zadnji odgovor, kjer samo ponavljaš isto kot do sedaj. Kar pa ni odgovor na moje vprašanje.

Klikni za razširitev

Uporabnik johan_blond je napisal:

Od kje je prišl dokazano čist vzorec na podlagi katerega so določili PCR?
Pacient

dokazano čist vzorec
Kaj je čisto pri bioloških vzorcih je itak stvar definicije, že samo če kot čist definiraš "suh vzorec", se pravi brez vode, lahko samo rečem "good luck with that" (pa v nekaterih strokah, je brezvodni vzorec standard)
Realno gledano, je čist SARS-CoV-2 vzorec, ki je pravi. in tisti, ki ne vsebuje drugih virusov. In to se preverja na več načinov (multiplex PCR, ....) Niti ene stvari ni, ki bi dala vsaj slutnjo da je to problem.

Npr. ljudje, ki delajo s celičnimi linijami, imajo protokole precej razdelane, kako nedvoumno potrditi, da je celićna linija prava (čista) (je pa tudi resnici na ljubo priznati, da je (včasih/pri nekaterih) dejansko bilo poleg nazivnega, še mnogokaj drugega prisotnege), tako da je to vseeno relevantno vprašanje.

ki so ga preverili s PCR (če sem kje zgrešil kontrolo
PCR, ko ga pižgeš, in preden greš delat, itak imaš negativno in pozitivno kontrolo (tega niti ponavadi najvajo, ker je itak vključena, posredno je itak navedena ko se sklicujejo na proizajalca oziroma v skladu s katerimi smernicami so delali). Zagotovo je bil narejeno pomnoževanje s slepim vzorcem (osnovni protokol dela s PCR).

Še enkrat, kateri kontrolni vzorec pogrešaš.

In še enkrat, ko so gojili virus v celicah, vedno (morajo) preveriti genetsko stabilnost. Tudi če je bil originalen vzorec kontaminiran s (vstavi poljubno) in tega ni bilo v končni produkciji, je za diskusijo ali je virus bil v pacientovem specimenu in ali si uspel gojiiti virus nepombno.

Ja, virus je bil prisoten in ja, uspel si namnožiti virus (in točno tega o čemur se pogovrajmo in si ga analizral s PCR)

Klikni za razširitev

Uporabnik mosseero je napisal:

Žal znanja ni, sicer ne bi bedarij spraševal.

Klikni za razširitev

Step-by-Step Procedure to Isolate an Unknown Virus

1. Sample Collection

• Collect specimens from infected individuals or environments (e.g., blood, saliva, tissue, soil, water).
• Use sterile containers and maintain cold chain protocols to preserve viral integrity.


2. Filtration and Pre-Treatment

• Pass the sample through membrane filters (typically 0.22 µm) to remove bacteria and larger particles A.
• Treat with antibiotics to eliminate any residual bacterial contamination.


3. Cultivation of Host Cells

• Prepare a culture of susceptible host cells (e.g., human epithelial cells, animal cells, or bacterial lawns for bacteriophages).
• Grow cells in vitro (e.g., Petri dishes, flasks) under controlled conditions A.


4. Inoculation

• Introduce the filtered sample into the host cell culture.
• Incubate under optimal conditions for viral replication (temperature, CO₂ levels, nutrients).


5. Observation of Cytopathic Effects (CPE)

• Monitor the host cells for signs of viral infection:• Cell lysis
• Syncytia formation (fusion of cells)
• Inclusion bodies
• Changes in cell morphology B



6. Harvesting Viral Particles

• Once CPE is observed, collect the supernatant containing viral particles.
• Use differential centrifugation to separate viruses from cell debris C.


7. Purification

• Apply density gradient centrifugation (e.g., sucrose or cesium chloride gradient) to isolate pure viral particles C.
• Extract the concentrated viral band using a pipette.


8. Quantification and Assay

• Determine viral titer using:• Plaque assays (for lytic viruses)
• TCID₅₀ (Tissue Culture Infective Dose)
• Electron microscopy with latex bead comparison C



9. Identification

• Use molecular techniques:• PCR or RT-PCR for viral genome detection
• Sequencing to identify unknown viral species
• ELISA or immunofluorescence for viral proteins

Klikni za razširitev

Uporabnik mosseero je napisal:

Tale izjava je cel smeh: "znanje je tudi tam nekje zadaj". Žal znanja ni, sicer ne bi bedarij spraševal.

Klikni za razširitev